Was ist das Prinzip eines Sandwich ELISAs?

Ein Sandwich-ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbentay) ist eine immunologische Methode, die zur Quantifizierung von Proteinen, Antigenen oder Antikörpern in einer Probe verwendet wird. Hier sind die grundlegenden Schritte und das Prinzip:

1. **Beschichtung der Platte**: Eine Mikrotiterplatte wird mit einem spezifischen Antikörper beschichtet, der an das Zielantigen bindet. Dieser Antikörper ist an die Oberfläche der Platte gebunden.

2. **Probenzugabe**: Die Probe, die das Zielantigen enthält, wird auf die beschichtete Platte gegeben. Wenn das Antigen vorhanden ist, bindet es an den immobilisierten Antikörper.

3. **Waschen**: Nach der Inkubation wird die Platte gewaschen, um ungebundene Substanzen zu entfernen. Dies stellt sicher, dass nur das gebundene Antigen verbleibt.

4. **Zugabe eines zweiten Antikörpers**: Ein zweiter, enzymgekoppelter Antikörper, der ebenfalls spezifisch für das Zielantigen ist, wird hinzugefügt. Dieser Antikörper bindet an ein anderes Epitope des Antigens, wodurch ein „Sandwich“ aus Antikörper-Antigen-Antikörper entsteht.

5. **Erneutes Waschen**: Die Platte wird erneut gewaschen, um ungebundene, enzymgekoppelte Antikörper zu entfernen.

6. **Substratzugabe**: Ein Substrat für das Enzym wird hinzugefügt. Das Enzym, das an den zweiten Antikörper gebunden ist, katalysiert eine Reaktion, die zu einer messbaren Farbänderung führt.

7. **Messung**: Die Intensität der Farbänderung wird mit einem Spektralphotometer gemessen. Die Intensität ist proportional zur Menge des Zielantigens in der Probe.

Durch die Verwendung von zwei Antikörpern wird eine hohe Spezifität und Sensitivität erreicht, weshalb der Sandwich-ELISA eine weit verbreitete Methode in der biomedizinischen Forschung und Diagnostik ist.