5 Fragen zu Immunoassay

ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) ist ein heterogener Immunoassay. Das bedeutet, dass es eine Trennung von gebundenen und ungebundenen Komponenten während des Assay-Prozesses erfordert.

Die Interaktion von Antikörpern im Blut des Patienten mit den Antikörpern im Immunoassay kann zu gravierenden analytischen Störungen führen, weil diese Interaktionen unspezifische Bindungen oder Kreuzreaktionen verursachen können. Dies kann die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der Testergebnisse beeinträchtigen. Hier sind einige spezifische Gründe: 1. **Heterophile Antikörper**: Patienten können heterophile Antikörper haben, die gegen Tierantikörper gerichtet sind, die häufig in Immunoassays verwendet werden. Diese heterophilen Antikörper können sowohl mit den Fang- als auch mit den Detektionsantikörpern im Assay interagieren und falsche Signale erzeugen. 2. **Rheumafaktoren**: Rheumafaktoren sind Autoantikörper, die gegen den Fc-Teil von IgG gerichtet sind. Sie können ebenfalls unspezifische Bindungen eingehen und die Assay-Ergebnisse verfälschen. 3. **Human Anti-Mouse Antibodies (HAMA)**: Patienten, die mit Mausantikörpern behandelt wurden oder in Kontakt gekommen sind, können HAMA entwickeln. Diese Antikörper können spezifisch mit Mausantikörpern im Assay interagieren und zu falsch positiven oder falsch negativen Ergebnissen führen. 4. **Interferierende Substanzen**: Andere Proteine oder Substanzen im Blut des Patienten können ebenfalls mit den Assay-Komponenten interagieren und die Signalgebung stören. Diese Störungen können zu falschen Diagnosen oder ungenauen Messungen führen, was die klinische Entscheidungsfindung negativ beeinflussen kann. Daher ist es wichtig, Assays sorgfältig zu validieren und gegebenenfalls Maßnahmen zur Minimierung solcher Interferenzen zu ergreifen.

Immunoassays und photometrische Messungen sind zwei unterschiedliche Methoden zur Analyse von Proben, und ihre Spezifität und Sensitivität können je nach Anwendung variieren. **Immunoassays:** - **Spezifität:** Immunoassays sind in der Regel sehr spezifisch, da sie auf der Bindung von Antikörpern an spezifische Antigene basieren. Diese Bindung ist hochselektiv, was bedeutet, dass Immunoassays oft in der Lage sind, ein bestimmtes Molekül in einer komplexen Mischung zu identifizieren. - **Sensitivität:** Immunoassays können sehr sensitiv sein, da sie in der Lage sind, sehr geringe Mengen eines Analyten zu detektieren. Dies wird oft durch die Verwendung von Enzymen, Fluoreszenz oder Radioaktivität als Signalverstärker erreicht. **Photometrische Messungen:** - **Spezifität:** Photometrische Messungen basieren auf der Absorption von Licht durch eine Substanz bei einer bestimmten Wellenlänge. Die Spezifität hängt von der chemischen Reaktion ab, die zur Bildung des farbigen Produkts führt. Diese Methode kann weniger spezifisch sein, wenn andere Substanzen in der Probe ebenfalls Licht bei ähnlichen Wellenlängen absorbieren. - **Sensitivität:** Die Sensitivität photometrischer Messungen ist oft geringer im Vergleich zu Immunoassays, da sie auf der direkten Messung der Lichtabsorption beruhen. Die Nachweisgrenze hängt von der Extinktionskoeffizienten des Analyten und der Empfindlichkeit des Photometers ab. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Immunoassays in der Regel spezifischer und sensitiver sind als photometrische Messungen, insbesondere wenn es darum geht, geringe Mengen eines spezifischen Analyten in einer komplexen Probe zu detektieren.

Die Analysezeit eines typischen Immunoassays kann stark variieren, abhängig von der Art des Assays und den spezifischen Bedingungen. Im Allgemeinen dauert ein Standard-Enzyme-Linked Immunosorbent Ass (ELISA) 2 bis 5 Stunden. Schnellere Varianten, wie Point-of-Care-Tests, können Ergebnisse in 15 bis 30 Minuten liefern, während komplexere Assays, wie einige Multiplex-Immunoassays, mehrere Stunden bis zu einem ganzen Tag in Anspruch nehmen können.

Ein ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbentay) ist ein biochemisches Verfahren, das zur quantitativen Bestimmung von Antigenen oder Antikörpern in einer Probe verwendet wird. Es basiert auf der spezifischen Bindung zwischen Antigenen und Antikörpern und nutzt ein Enzym, das an einen Antikörper gebunden ist, um eine messbare Reaktion zu erzeugen. Der Ablauf eines ELISA-Tests umfasst typischerweise folgende Schritte: 1. **Beschichtung**: Eine Mikrotiterplatte wird mit dem zu detektierenden Antigen oder Antikörper beschichtet. 2. **Blockierung**: Ungebundene Stellen auf der Platte werden blockiert, um unspezifische Bindungen zu verhindern. 3. **Probenzugabe**: Die Probe, die das Zielantigen oder den Antikörper enthält, wird hinzugefügt. Wenn das Ziel vorhanden ist, bindet es an die beschichteten Antikörper. 4. **Waschen**: Ungebundene Bestandteile werden entfernt. 5. **Sekundärantikörper**: Ein enzymgekoppelter sekundärer Antikörper wird hinzugefügt, der spezifisch an das Ziel bindet. 6. **Substratzugabe**: Ein Substrat für das Enzym wird hinzugefügt, das eine farbige Reaktion erzeugt. 7. **Messung**: Die Intensität der Farbe wird gemessen, was proportional zur Menge des Zielanalyten in der Probe ist. ELISA-Tests werden häufig in der medizinischen Diagnostik, der Lebensmittelindustrie und der Forschung eingesetzt, um beispielsweise Infektionen, Allergien oder die Konzentration von Biomarkern zu bestimmen.