2 Fragen zu Bandenmuster

Um eine Restriktionskarte aus den Bandenmustern bei der Gelelektrophorese abzuleiten, folge diesen Schritten: 1. **DNA-Verdauung**: Schneide die DNA mit verschiedenen Restriktionsenzymen oder Kombinationen von Enzymen. Erstelle mehrere Proben, jede mit einem anderen Enzym oder Enzymmix behandelt. 2. **Gelelektrophorese**: Lade die verdauten DNA-Proben auf ein Agarosegel und führe die Elektrophorese durch, um die DNA-Fragmente nach Größe zu trennen. 3. **Bandenmuster analysieren**: Nach der Elektrophorese färbe das Gel (z.B. mit Ethidiumbromid) und visualisiere die DNA-Banden unter UV-Licht. Notiere die Anzahl und Größe der Banden in jeder Spur. 4. **Vergleiche die Muster**: Vergleiche die Bandenmuster der verschiedenen Verdauungen. Identifiziere Fragmente, die in mehreren Spuren vorkommen, um gemeinsame Schnittstellen zu erkennen. 5. **Fragmentgrößen bestimmen**: Bestimme die Größe der Fragmente anhand eines DNA-Leiters (Molekulargewichtsmarker), der ebenfalls auf das Gel geladen wurde. 6. **Karte erstellen**: Beginne mit der ungeschnittenen DNA und füge die Schnittstellen der Restriktionsenzyme basierend auf den Fragmentgrößen und den Mustern hinzu. Zeichne die relative Position der Schnittstellen auf der DNA. 7. **Überprüfen und anpassen**: Überprüfe die Karte, indem du sicherstellst, dass die Summe der Fragmentgrößen in jeder Spur der Gesamtgröße der ungeschnittenen DNA entspricht. Passe die Karte gegebenenfalls an, um alle Daten zu berücksichtigen. Durch diese Schritte kannst du eine Restriktionskarte erstellen, die die Positionen der Schnittstellen der verwendeten Restriktionsenzyme auf der DNA zeigt.

Bei einer RNA-Extraktion werden die Banden typischerweise durch eine Gelelektrophorese sichtbar gemacht. Diese Banden repräsentieren verschiedene RNA-Moleküle, die nach ihrer Größe getrennt wurden. Hier sind die Hauptkomponenten, die man in den Banden sehen kann: 1. **Ribosomale RNA (rRNA)**: Die prominentesten Banden sind normalerweise die 28S und 18S rRNA bei eukaryotischen Zellen. Diese Banden sind ein Indikator für die Integrität der RNA. Ein scharfes und klares 28S und 18S rRNA-Band zeigt, dass die RNA nicht degradiert ist. 2. **Messenger RNA (mRNA)**: mRNA-Banden sind oft weniger prominent und erscheinen als ein diffuses Hintergrundsignal, da mRNA-Moleküle in der Regel eine Vielzahl von Längen haben. 3. **Transfer RNA (tRNA)** und **andere kleine RNA-Moleküle**: Diese können als schwächere Banden oder als ein diffuses Signal im unteren Bereich des Gels erscheinen. Die Qualität und Reinheit der extrahierten RNA kann durch das Verhältnis der Intensität der 28S zu 18S rRNA-Banden beurteilt werden. Ein Verhältnis von etwa 2:1 (28S:18S) wird als Indikator für intakte RNA angesehen.