Weshalb wird Isopropanol zum Überstand bei der Plasmidisolierung dazugegeben und was passiert mit der Plasmid-DNA?

Isopropanol wird bei der Plasmid-Isolierung hinzugefügt, um die Plasmid-DNA zu präzipitieren. Der Prozess funktioniert folgendermaßen: 1. **Präzipitation**: Isopropanol hat die Fähigkeit, DNA aus einer Lösung zu fällen, da es die Löslichkeit der DNA verringert. Wenn Isopropanol zu einer Lösung hinzugefügt wird, in der sich Plasmid-DNA und andere Zellbestandteile befinden, führt dies dazu, dass die DNA aus der Lösung ausfällt. 2. **Entfernung von Verunreinigungen**: Durch die Präzipitation mit Isopropanol werden auch viele der anderen Zellbestandteile, wie Proteine und RNA, entfernt, die nicht in der DNA enthalten sind. Dies hilft, die Reinheit der isolierten Plasmid-DNA zu erhöhen. 3. **Zentrifugation**: Nach der Zugabe von Isopropanol wird die Lösung zentrifugiert, wodurch die Plasmid-DNA als Pellet am Boden des Röhrchens sedimentiert. Der Überstand kann dann entfernt werden, und das Pellet kann gewaschen werden, um verbleibende Verunreinigungen zu entfernen. Insgesamt ermöglicht die Zugabe von Isopropanol eine effiziente Isolierung und Reinigung der Plasmid-DNA, die für nachfolgende Anwendungen wie Klonierung oder Sequenzierung benötigt wird.