Der LDH-Assay (Lactatdehydrogenase-Assay) ist eine biochemische Methode zur Messung der Aktivität des Enzyms Lactatdehydrogenase (LDH) in einer Probe. LDH ist ein Enzym, das in fast allen Körperzellen vorkommt und eine wichtige Rolle im Stoffwechsel spielt, insbesondere im anaeroben Abbau von Glukose zu Laktat. ### Funktionsweise des LDH-Assays: 1. **Probenvorbereitung**: Zellen oder Gewebeproben werden lysiert, um den Zellinhalt freizusetzen, einschließlich LDH. 2. **Reaktionsmischung**: Die Probe wird mit einer Reaktionsmischung inkubiert, die typischerweise NAD+ (Nicotinamidadenindinukleotid) und Laktat enthält. 3. **Enzymatische Reaktion**: LDH katalysiert die Umwandlung von Laktat zu Pyruvat, wobei NAD+ zu NADH reduziert wird. 4. **Messung**: Die Menge an NADH, die gebildet wird, kann spektrophotometrisch bei 340 nm gemessen werden, da NADH Licht bei dieser Wellenlänge absorbiert. Die Rate der NADH-Bildung ist proportional zur LDH-Aktivität in der Probe. ### Verfügbare Kits und deren Funktionsweise: Es gibt verschiedene kommerzielle Kits für den LDH-Assay, die alle auf dem oben beschriebenen Prinzip basieren. Hier sind einige Beispiele: 1. **CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay (Promega)**: - Misst die LDH-Freisetzung aus beschädigten Zellen. - Die Reaktion wird durch die Reduktion von NAD+ zu NADH und die anschließende Umwandlung eines Tetrazoliumsalzes in ein farbiges formazan Produkt gemessen. - [Promega CytoTox 96®](https://www.promega.com/products/cell-health-assays/cytotoxicity-assays/cytotox-96-non-radioactive-cytotoxicity-assay/) 2. **LDH Cytotoxicity Detection Kit (Roche)**: - Misst ebenfalls die LDH-Freisetzung aus beschädigten Zellen. - Verwendet eine ähnliche Methode wie der CytoTox 96® Assay, bei der die Reduktion von NAD+ zu NADH und die Umwandlung eines Tetrazoliumsalzes in ein farbiges Produkt gemessen wird. - [Roche LDH Cytotoxicity Detection Kit](https://lifescience.roche.com/shop/products/ldh-cytotoxicity-detection-kit) 3. **TOX7 In Vitro Toxicology Assay Kit, Lactate Dehydrogenase based (Sigma-Aldrich)**: - Misst die LDH-Freisetzung aus beschädigten Zellen. - Verwendet eine kolorimetrische Methode, bei der die Umwandlung von NAD+ zu NADH und die anschließende Reduktion eines Tetrazoliumsalzes zu einem farbigen Produkt gemessen wird. - [Sigma-Aldrich TOX7 Kit](https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/tox7) Diese Kits enthalten in der Regel alle notwendigen Reagenzien und detaillierte Protokolle, um den Assay durchzuführen. Die Wahl des Kits hängt von den spezifischen Anforderungen deines Experiments ab, wie z.B. der Sensitivität, der Art der Proben und den verfügbaren Geräten.