X-Gal, auch bekannt als 5-Brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid, kann in seine Bestandteile gespalten werden, wobei die Hauptbestandteile Galactose und 5-Brom-4-chloroindol freigesetzt werden. Diese Spaltung erfolgt typischerweise durch enzymatische Aktivität von β-Galactosidase, die die Galactose von dem Indol-Rest trennt.