X Gal, auch bekannt als 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranosid, wird in der Regel durch enzymatische Hydrolyse in zwei Hauptbestandteile gespalten: 5-Bromo-4-chloro-3-hydroxyindol und Galactose. Diese Spaltung erfolgt durch die Wirkung von β-Galactosidase, einem Enzym, das Galactose von der X Gal-Molekülstruktur abspaltet.