Wie funktioniert die Patch Clamp Technik?

Antwort

Die Patch-Clamp-Technik ist eine elektrophysiologische Methode, die verwendet wird, um den Ionenstrom durch einzelne Ionenkanäle in Zellmembranen zu messen. Hier ist eine Übersicht, wie die Technik funktioniert: 1. **Vorbereitung der Zelle**: Eine Zelle wird in eine Lösung gegeben, die die physiologischen Bedingungen nachahmt. 2. **Mikropipette**: Eine feine Glaspipette mit einer sehr kleinen Öffnung (Durchmesser von etwa 1 Mikrometer) wird verwendet. Diese Pipette ist mit einer leitfähigen Lösung gefüllt und mit einem Elektrodenverstärker verbunden. 3. **Kontakt mit der Zellmembran**: Die Spitze der Pipette wird vorsichtig an die Zellmembran gebracht. Durch leichten Unterdruck wird die Pipette an die Membran gesaugt, wodurch ein hochwiderstandsfähiger Dichtungsring (Gigaohm-Dichtung) entsteht. 4. **Patch-Modi**: - **Cell-Attached Mode**: Die Pipette bleibt an der Membran befestigt, und der Ionenstrom durch die Kanäle unter der Pipettenspitze wird gemessen. - **Whole-Cell Mode**: Durch kurzes Ansaugen oder durch einen kurzen elektrischen Impuls wird die Membran unter der Pipette aufgebrochen, sodass das Innere der Pipette mit dem Zellinneren in Kontakt kommt. Dies ermöglicht die Messung des gesamten Zellstroms. - **Inside-Out Patch**: Ein Stück der Membran wird von der Zelle abgezogen, sodass die Innenseite der Membran der äußeren Lösung ausgesetzt ist. Dies ist nützlich, um die Wirkung von intrazellulären Molekülen auf die Ionenkanäle zu untersuchen. - **Outside-Out Patch**: Nach dem Whole-Cell Mode wird die Pipette langsam zurückgezogen, sodass sich ein Membranfetzen bildet, bei dem die Außenseite der Membran der äußeren Lösung ausgesetzt ist. Dies ist nützlich, um die Wirkung von extrazellulären Molekülen zu untersuchen. 5. **Messung und Analyse**: Der Ionenstrom wird durch die Pipette gemessen und durch den Verstärker verstärkt. Diese Signale werden dann aufgezeichnet und analysiert, um Informationen über die Eigenschaften der Ionenkanäle zu erhalten, wie z.B. Leitfähigkeit, Öffnungs- und Schließverhalten und Reaktion auf verschiedene Stimuli. Die Patch-Clamp-Technik ist eine leistungsstarke Methode, die in der Neurobiologie, Pharmakologie und Zellbiologie weit verbreitet ist, um die Funktion von Ionenkanälen und die elektrische Aktivität von Zellen zu untersuchen.

Kategorie: Biologie Tags: Patch Clamp Zelle
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