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Warum bindet bei der BAC-DNA-Aufreinigung am Ende nur die BAC-DNA an die DNA-Column?
AntwortBei der BAC (Bacterial Artificial Chromosome) DNA-Aufreinigung wird eine spezielle Säule verwendet, die selektiv DNA bindet. Der Prozess umfasst mehrere Schritte, die sicherstellen, dass am Ende nur die BAC-DNA an die Säule bindet: 1. **Zelllyse**: Die Bakterienzellen werden aufgebrochen, um die DNA freizusetzen. 2. **Neutralisation und Klärung**: Zelltrümmer und Proteine werden entfernt, oft durch Zentrifugation. 3. **Bindung**: Die Lösung wird durch eine Säule geleitet, die eine spezielle Matrix enthält, die DNA unter bestimmten Bedingungen (z.B. hoher Salzkonzentration) bindet. 4. **Waschen**: Die Säule wird mit Pufferlösungen gewaschen, um Verunreinigungen zu entfernen, während die DNA an der Säule gebunden bleibt. 5. **Elution**: Schließlich wird die DNA durch Zugabe eines Elutionspuffers (meist mit niedriger Salzkonzentration) von der Säule gelöst. Die Selektivität der Bindung beruht auf den chemischen Eigenschaften der Säulenmatrix und den Pufferbedingungen, die so eingestellt sind, dass sie bevorzugt die BAC-DNA binden und andere Moleküle abwaschen.
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