1 Frage zu Rekombinase

Rekombinasen sind Enzyme, die DNA-Stränge schneiden und wieder zusammenfügen können, und sie spielen eine wichtige Rolle in der Molekularbiologie, insbesondere bei der Rekombination von DNA. Die Herstellung von Rekombinasen erfolgt in mehreren Schritten: 1. **Genidentifikation**: Zunächst wird das Gen, das für die Rekombinase kodiert, identifiziert. Dies kann durch Genomsequenzierung oder durch Datenbanken geschehen. 2. **Klone des Gens**: Das identifizierte Gen wird in ein Plasmid kloniert, ein kleines, ringförmiges DNA-Molekül, das in Bakterien repliziert werden kann. Dies geschieht häufig durch Restriktionsenzym-vermittelte Klonierung oder durch PCR (Polymerase-Kettenreaktion). 3. **Transformation**: Das Plasmid wird in Bakterien (z.B. E. coli) eingeführt, die dann das Plasmid und somit das Gen für die Rekombinase replizieren. 4. **Proteinexpression**: Die Bakterien werden unter Bedingungen kultiviert, die die Expression des Rekombinase-Proteins fördern. Oft werden spezielle Induktionsmittel verwendet, um die Expression zu steuern. 5. **Proteinreinigung**: Nach der Expression wird das Rekombinase-Protein aus den Bakterien extrahiert und gereinigt. Dies geschieht häufig durch Affinitätschromatographie oder andere biochemische Methoden. 6. **Charakterisierung**: Schließlich wird die rekombinante Rekombinase charakterisiert, um ihre Aktivität und Spezifität zu überprüfen. Durch diese Schritte kann eine funktionelle Rekombinase hergestellt werden, die in verschiedenen Anwendungen, wie z.B. in der Gentechnik oder der Genomeditierung, eingesetzt werden kann.