1 Frage zu Invitro

Für die in vitro Transkription sind mehrere Faktoren und Bedingungen notwendig: 1. **DNA-Vorlage**: Eine geeignete DNA-Vorlage, die das zu transkribierende Gen enthält, ist erforderlich. Diese kann plasmidisch oder linearisiert sein. 2. **RNA-Polymerase**: Eine spezifische RNA-Polymerase, die in der Lage ist, die DNA-Vorlage zu transkribieren. Häufig verwendete Polymerasen sind T7, T3 oder SP6 RNA-Polymerasen, abhängig von der Promotorsequenz. 3. **Nukleotide**: Alle vier ribonukleotidtriphosphate (ATP, CTP, GTP, UTP) müssen in ausreichender Menge vorhanden sein, um die RNA-Synthese zu ermöglichen. 4. **Pufferlösung**: Ein geeigneter Puffer, der die notwendigen Ionen (z.B. Mg²⁺) und pH-Bedingungen bereitstellt, ist wichtig für die Aktivität der RNA-Polymerase. 5. **Temperatur**: Die Reaktion sollte bei einer optimalen Temperatur für die verwendete RNA-Polymerase durchgeführt werden, oft zwischen 37 °C und 42 °C. 6. **Inhibitoren**: Falls notwendig, sollten Inhibitoren von RNasen hinzugefügt werden, um die RNA während der Synthese zu schützen. Diese Faktoren sind entscheidend, um eine erfolgreiche in vitro Transkription zu gewährleisten.